離心機(jī)密度梯度區(qū)帶離心法簡稱區(qū)帶離心法，區(qū)帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。此分離方法的優(yōu)點(diǎn)是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；②適應(yīng)范圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒，又能分離有一定浮力密度差的顆粒；③顆粒不會(huì)擠壓變形，能保持顆?；钚?，并防止已形成的區(qū)帶由于對(duì)流而引起混合。此分離方法的缺點(diǎn)是：①離心時(shí)間較長；②需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液；③操作嚴(yán)格，不易掌握。

離心機(jī)區(qū)帶離心法又可分為差速區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法兩種：

(1)離心機(jī)差速區(qū)帶離心法：當(dāng)不同的顆粒間存在沉降速度差時(shí)(不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數(shù)差)。在一定的離心力作用下，顆粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的顆粒(20%的沉降系數(shù)差或更少)或分子量相差3倍的蛋白質(zhì)，與顆粒的密度無關(guān)，大小相同，密度不同的顆粒(如線粒體，溶酶體等)不能用此法分離。離心管先裝好密度梯度介質(zhì)溶液，樣品液加在梯度介質(zhì)的液面上，離心時(shí)，由于離心力的作用，顆粒離開原樣品層，按不同沉降速度向管底沉降，離心一定時(shí)間后，沉降的顆粒逐漸分開，最后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶，沉降系數(shù)越大，往下沉降越快，所呈現(xiàn)的區(qū)帶也越低，離心必須在沉降最快的大顆粒到達(dá)管底前結(jié)束，樣品顆粒的密度要大于梯度介質(zhì)的密度。梯度介質(zhì)通常用蔗糖溶液，其最大密度和濃度可達(dá)1.28kg/cm3和60％。此離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間

(2)離心機(jī)等密度區(qū)帶離心法：離心管中預(yù)先放置好梯度介質(zhì)，樣品加在梯度液面上，或樣品預(yù)先與梯度介質(zhì)溶液混合后裝入離心管，通過離心形成梯度，這就是預(yù)形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式。離心時(shí)，樣品的不同顆粒向上浮起，一直移動(dòng)到與它們的密度相等的等密度點(diǎn)的特定梯度位置上，形成幾條不同的區(qū)帶，這就是等密度離心法。體系到達(dá)平衡狀態(tài)后，再延長離心時(shí)間和提高轉(zhuǎn)速已無意義，處于等密度點(diǎn)上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時(shí)間所影響，提高轉(zhuǎn)速可以縮短達(dá)到平衡的時(shí)間，離心所需時(shí)間以最小顆粒到達(dá)等密度點(diǎn)(即平衡點(diǎn))的時(shí)間為基準(zhǔn)，有時(shí)長達(dá)數(shù)日。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越好，與顆粒大小和形狀無關(guān)，但大小和形狀決定著達(dá)到平衡的速度、時(shí)間和區(qū)帶寬度。等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質(zhì)通常為氯化絕CSCl，其密度可達(dá)1.7g/cm3。此法可分離核酸、亞細(xì)胞器等，也可以分離復(fù)合蛋白質(zhì)，但簡單蛋白質(zhì)不適用。

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